Saturday, April 22, 2006

Aseguramiento de la Calidad de Resultados Microbiológicos

1. OBJETIVO
El presente programa se lleva a cabo para asegurar que los resultados generados por los ensayos realizados presentan un alto grado de confianza.

2. ALCANCE
Se consideran dentro de este programa, todas las actividades del Laboratorio implicadas directamente en los resultados obtenidos a través de ensayos microbiológicos.

3. RESPONSABILIDADES
El Jefe de Laboratorio es responsable de llevar a cabo y supervisar el cumplimiento de este programa.
El Analista es responsable de desarrollar las pautas indicadas para el aseguramiento de la calidad de los resultados que emite.
El Jefe de Aseguramiento de la Calidad se responsabiliza por la vigilancia permanente del cumplimiento de las actividades programadas, además realiza coordinaciones con el Jefe de Laboratorio.

4. ACTIVIDADES
El presente programa contempla los siguientes puntos:
Método Actividad Parámetro Criterio de Aceptación Frecuencia Registro Acción Correctiva
Recuento de Microorganismos Confirmación para la Operación del Método Equipos y Materiales:
-equipos calibrados, medios de cultivo y reactivos, material de referencia Tenencia Verificar para cada Método a implementar LI-14:
Lista de Verificación para Validar Ensayos No se desarrolla el ensayo hasta completar lo necesario para el método
Variabilidad Analítica Precisión Analítica
(Criterio de Precisión: CP) CP < ó =
3.27 R General:
Al verificar el método y luego de cada batch de análisis diario por analista (10% del batch) Registro: Criterio de Precisión Valores mayores a CP: Desechar resultados hasta la última verificación o chequeo del CP.
Competencia Técnica del Analista Índice de Poisson < 3.84 Semestralmente Registro: Competencia Técnica del Analista Si no se cumple algún criterio: Reentrenamiento
Diferencia Relativa 5% y 10%
Verificación de la Calidad de los Resultados Repetibilidad de Resultados Diferencia de +/-15% como máximo Mensualmente en por lo menos 02 unidades por tipo de muestra que puedan ser retenidas. Registro:
Control de Calidad Interno Valores mayores: Revisar y ajustar todos los parámetros del SGC del laboratorio


Método Actividad Parámetro Criterio de Aceptación Frecuencia Registro Acción Correctiva
Recuento por NMP Confirmación para la Operación del Método Equipos y Materiales:
-equipos calibrados, medios de cultivo y reactivos, material de referencia Tenencia Verificar para cada Método a implementar LI-14:
Lista de Verificación para Validar Ensayos No se desarrolla el ensayo hasta completar lo necesario para el método
Competencia Técnica del Analista Repetibilidad Analítica Recuperación de material de referencia:
Resultados dentro de los límites para el 95% de confianza Antes de utilizar el método normalizado y
Periódicamente:
Semestralmente Registro: Competencia Técnica del Analista Si no se cumple algún criterio: Reentrenamiento
Reproducibilidad Analítica
Verificación de Calidad de los Resultados Repetibilidad de Resultados Resultados en muestras retenidas: Dentro de los límites para el 95% de confianza Mensualmente en por lo menos 02 unidades por tipo de muestra que puedan ser retenidas. Registro:
Control de Calidad Interno Valores fuera del criterio: Revisar y ajustar todos los parámetros del sistema de gestión de la calidad del laboratorio
Detección de Microorganismos Confirmación para la Operación del Método Equipos y Materiales:
-equipos calibrados, medios de cultivo y reactivos, material de referencia Tenencia Verificar para cada Método a implementar LI-14:
Lista de Verificación para Validar Ensayos No se desarrolla el ensayo hasta completar lo necesario para el método
Competencia Técnica del Analista Recuperación del microorganismo a detectar Recuperación de material de referencia:
Eficiencia al 90% Semestralmente Registro: Competencia Técnica del Analista Si no se cumple el criterio: Reentrenamiento
TODOS Prueba Interlaboratorio Reporte z-score calculado por el organizador Menor o igual a 2: Resultados satisfactorios Anualmente Informe Valores insatisfactorios: > 2
Revisión y ajuste de todos los parámetros propuestos en este programa




5. DESARROLLO Y CALCULOS

5.1 Confirmación para la Operación del Método

El Analista y el Jefe de Laboratorio evaluarán la tenencia de los equipos y materiales requeridos para la realización del ensayo, actividad que se registrará en el formato LI-14: Lista de Verificación para Validar Ensayos.

5.2 Variabilidad Analítica

Para cada método de ensayo que lo requiera de acuerdo al programa (recuentos de microorganismos), se determina la Precisión Analítica mediante el cálculo del Criterio de Precisión de los analistas, el cual será igual o menor a 3.27 R. El Jefe de Laboratorio calcula y registra el criterio de precisión en un Gráfico de Control.

• Criterio de Precisión

Para su cálculo se deben colectar por lo menos 15 resultados de ensayos para un tipo de muestra.

El tratamiento de datos sigue el esquema:

Muestra N° Rec 1 Rec 2 Log Rec 1 Log Rec 2 Diferencia Absoluta
(1) (2) (3) (4) (5) (6)
1
2

14
15

Cálculos:

1) Sumatoria de Diferencias Absolutas (R)
2) Promedio de R
3) Criterio de Precisión:
= 3.27 x Promedio de R

Se recomienda construir un gráfico de control para determinar la Aceptación de los resultados emitidos por el laboratorio.
Si el criterio de precisión es mayor al establecido para el laboratorio, descartar todos los resultados analíticos desde la última precisión chequeada.

5.3 Competencia Técnica del Analista

Esta determinación se realizará semestralmente para cada Analista, cada vez que cualquier método del alcance se incluya en la rutina y cada vez que el Analista evidencie alguna tendencia negativa durante la ejecución de su trabajo. Su fin es el de asegurar que el Analista sea lo suficientemente competente para reproducir datos.



• Recuento en Placa

A. INDICE DE DISPERSIÓN DE POISSON : D2

A.1. Lectura De Recuentos (Paralelos) En Una Dilución (02 Placas):

D2 = (A – B )2 A: Recuento 1° placa
(A + B) B :Recuento 2° placa


D2 = n  Xi2 - (  Xi )2 Para más de 02 placas
 Xi Xi : Recuento de cada placa
n : N° de placas


A.2. Lectura de Recuentos en 02 Diluciones Consecutivas:

D2 = (C1 – aC2 )2 C1:Recuento en V1, 1° placa: 1 ml
.a (C1 + C2) C2:Recuento en V2, 2° placa: 0.1 ml

a= V1 Generalmente es 10
V2

B. DIFERENCIA RELATIVA: RD

Cuando los dos recuentos los ha realizado la misma persona el más apropiado es el valor absoluto de la diferencia relativa (valor numérico sin signo). Sin embargo, cuando los recuentos los realizan diferentes personas, el signo tiene gran importancia.

RD = C1 – C2 = ln C1 – ln C2 C1: 1° Recuento Analista 1
ĉ C2: 2° Recuento Analista 2
ĉ: Promedio de Recuentos
• Multiplicar por 100 para obtener resultados en porcentajes.

Observación:
Para el Cálculo de la Diferencia Relativa, el segundo analista es aquel cuyo Criterio de Precisión es el más cercano al calculado de acuerdo al Programa de Aseguramiento de la Calidad

Si lo realiza el mismo analista se califica Repetibilidad.
Si lo realiza otro analista se califica Reproducibilidad.

Valores Límite

* Para Recuentos paralelos en una o más diluciones D2:
Igual o menor a 3.84
* Para Recuentos duplicados en una misma dilución RD:
Leída por el mismo analista : igual ó < 5%
Leída por 02 analistas : igual ó < 10%


• Recuento por NMP

La recuperación o valor del resultado obtenido por el mismo analista o por otro analista respecto a la muestra control (inoculada con material de referencia) debe estar entre los límites superior (LS) y límite inferior (LI) (95% de confianza) del valor NMP obtenido en la muestra de control. Los resultados obtenidos en la muestra de control son 03 como mínimo.

LI R1 < NMP R2 < LS R1 ; R1 y R2 : Recuentos 1 y 2

• Detección de Microorganismos

De 10 muestras (inoculadas y no inoculadas) se espera que el analista recupere el microorganismo problema en aquellas que lo posean y no en aquellas que no lo posean, con el 90% de eficiencia (09 aciertos).

5.4 Verificación de la Calidad de los Resultados

La verificación de los resultados en muestras retenidas se establece para determinar que los resultados obtenidos en muestras ya analizadas son fiables y que el sistema de gestión del laboratorio para la emisión de resultados es repetible y conforme.

Mediante una diferencia simple para los métodos de recuentos en placa y por comparación de resultados en otros métodos se realiza el cálculo de esta actividad:

• Recuentos en placa:

R2 = R1 +/- ( (R1 – R2) / R1) * 100 resultado no mayor a R1+/- 15% R1

• Recuento por NMP:

LI R1 < NMP R2 < LS R1 (95% de confianza)

5.5 Prueba Interlaboratorio

Se valora el desempeño del laboratorio para los ensayos que desarrolla asignándole una puntuación que indica su capacidad para reproducir datos satisfactorios bajo el sistema de gestión de la calidad que posee.

• Puntuación del Desempeño del Laboratorio

La valoración de la puntuación del desempeño del laboratorio participante se realiza mediante la siguiente expresión:

Z – score = xi - X vcv
S
Donde:
xi : valor promedio obtenido por el laboratorio participante
X vcv : valor de referencia asignado al material por el Organizador del Programa
S : desviación estándar correspondiente al material, asignado por el
Organizador del programa.

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